2018/05/28 Last update

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抗体を用いて，目的とする タンパク質 を染色する方法を免疫染色 immunostaining という。詳細はリンク先にまとめている。組織の固定に際して，主に以下の 3 点に留意する（1）。

1. 目的タンパク質の抗原性の保持（抗体に結合できる状態が保たれているかどうか）
2. 目的タンパク質の発現部位の保持（他の場所に移動していないかどうか）
3. 組織の形態の保持

組織の固定法によって，以下のような違いがみられる。（1）。

1. 未固定凍結: 抗原性がよく保持されるが，形態の保持が悪い。
2. 固定凍結: 抗原性，形態ともによく保持される。
3. パラフィン: 形態保持に優れるが，抗原性の保持が悪い。パラフィン切片に使用可能な抗体を選んで使う。標本は常温で保存が可能である。

アルデヒド系で固定すると，低分子の不溶化や形態保持に優れるが，タンパク質やペプチドの抗原保持に難点がある。

有機溶剤は脱水作用があり，これで固定すると組織が収縮してしまう可能性がある。高分子の抗原保持に優れる。

免疫染色では，抗体の特異性 も重要である。

組織の固定方法は，もちろん染色の種類によって異なるが，一般的には次の 3 通りである（1）。

1. 未固定凍結: 未固定のまま OCT コンパウンドに包埋して凍結切片を作る。
2. 固定凍結: 試薬で組織を固定したのち OCT コンパウンドに包埋し，凍結切片を作る。
3. パラフィン: 試薬で組織を固定したのち パラフィン包埋 し，切片を作る。

形態の保持はパラフィン切片が優れているが，煩雑であったり脂質染色に使えなかったりと，それぞれ一長一短がある。組織の固定には，以下のような試薬が使われる。大きく分けてアルデヒド系と有機溶剤系がある（1）。

アルデヒド系

• パラホルムアルデヒド Paraformaldehyde, PFA
• グルタルアルデヒド Glutaraldehyde

1. 蓮井 2012a. 免疫組織化学の基礎と応用. V. 組織・細胞の固定. 鹿児島大学レポジトリ http://hdl.handle.net/10232/15020